TÉCNICAS DE ANÁLISIS HEMATOLÓGICO

 PRÁCTICA: DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO EN TUBOS 1. OBJETIVOS Saber determinar el grupo sanguíneo 2. FUNDAMENTO La prueba de aglutinación en tubo es complementaria de la que se realiza en porta y sirve de confirmación de la anterior. Se prefiere la prueba en porta ya que suficientemente fiable y más rápida. Para realizar la prueba en tubo se precisa de una suspensión de hematíes para lo cual hay que realizar un lavado de hematíes previo con solución salina para evitar interferencias que pueda producir el suero. 3. MATERIALES - Tubos de centrífuga - Solución salina al 0'9% - Centrífuga - Muestra de sangre - Pipetas Pasteur - Reactivos Anti A, Anti B, Anti D y albúmina 4. PROTOCOLO 1. Lavado de hematíes 2. Suspensión de hematíes al 3% en 5 ml 3. Prueba en tubo: - Tomamos 4 tubos de centrífuga y rotulamos A, B, D y control (albúmina). - Añadimos dos gotas del reactivo correspondiente (Anti A, Anti B, Anti D, y C) más dos gotas de la suspensión de hematíes. - Centrifugamos a 1000 r

 PRÁCTICA: DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO EN PORTA 1. OBJETIVOS Saber determinar el grupo sanguíneo en porta 2. FUNDAMENTO Los sistemas ABO y Rh son los más importantes puesto que sus Ag/Ac son los que más reacciones produces y problemas derivados de ellos. La prueba en porta consiste en enfrentar en un portaobjetos una gota de sangre del paciente con una gota de un reactivo comercial con anticuerpos con Anti A, Anti B y Anti D comprobando si se produce aglutinación. Hay que tener en cuenta que la reacción se visualiza a temperatura ambiente para el ABO pero para el Rh mejor con calor (37ºC). 3. MATERIALES - Portaobjetos - Palillos de mezcla - Muestras de sangre - Reactivos Anti A, Anti B y Anti D  - Pipetas Pasteur 4. PROTOCOLO 1. Se divide el portaobjetos en dos partes, A y B. 2. Depositar una gota de suero Anti A y Anti B en la zona correspondiente. 3. Añadir al lado una gota de sangre previamente homogenizada. 4. Mezclar las gotas un palillo. 5. Oscilar el porta en movimiento de

 PRÁCTICA: FÓRMULA LEUCOCITARIA 1. OBJETIVOS Aprender a hacer recuentos de los distintos tipos de leucocitos, con respecto a su representación total por mm3 de sangre. 2. FUNDAMENTO Los leucocitos son un componente importante de la sangre y una pieza clave en el sistema inmunológico del cuerpo. Hay cinco tipos diferentes de leucocitos, cada uno con funciones específicas. Se pueden dividir en dos tipos principales: los  granulocitos ( neutrófilos, eosinófilos y basófilos)  y  agranulocitos ( linfocitos y monocitos). La fórmula leucocitaria consiste en la determinación del porcentaje que representa cada uno de los tipos de leucocitos vistos, con respecto al total de ellos. Una máquina especialmente diseñada o el especialista, cuenta el número de cada tipo de célula. El examen muestra si el número de células está en la proporción apropiada entre sí y si hay más o menos cantidad de un tipo de célula. 3. MATERIALES - Microscopio - Portaobjetos - Pipeta Pasteur - Muestra de sangre - Aceite d

PRÁCTICA: RECUENTO PLAQUETARIO EN FROTIS SANGUÍNEO 1. OBJETIVOS Determinar el número de plaquetas (PLT) presentes en un volumen determinado de sangre mediante el examen microscópico de una extensión sanguínea. Estudiar la morfología de los trombocitos. 2. FUNDAMENTO El recuento de plaquetas (PLT o PLQ) consiste en determinar el número de trombocitos presente en un volumen de sangre determinado. El recuento de plaquetas puede realizarse de forma aproximada contando los trombocitos presentes en varios campos de un frotis sanguíneo observado al microscópio. Sin embargo, también se puede hacer un recuento de plaquetas más exacto mediante el empleo de una cámara de recuento. 3. MATERIALES Y REACTIVOS Portaobjetos, microscopio y aceite de inmersión.  Tinción de May-Grünwald-Giemsa. (Puede hacerse con cualquier tinción habitual) 4. PROTOCOLO Realizar un frotis sanguíneo. Realizar la tinción de May-Grünwald-Giemsa. Colocar la extensión teñida en el microscopio. Con objetivo de 40x buscar una z

 PRÁCTICA: TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (TTPA) Objetivos Medir el tiempo de tromboplastina parcial activada Fundamento El tiempo de tromboplastina parcial activada permite valorar la vía intrínseca de la coagulación al poner en marcha in vitro el proceso empleando como desencadenante un factor activador de esa vía. Se usa para monitorizar las terapias anticoagulantes con heparina. Provocamos que un PPP coagule usan cefalina (suspensión de fosfolípidos obtenida del cerebro de animales) como sustituto del F3p + activador (sustancia cargada negativamente) + Ca+2. Materiales - Micropipetas y puntas de pipeta - Varillas de acero - Coagulómetro - Tubos Eppendorf Técnica 1. Introducir varilla de acero en cada una de la cubetas del coagulómetro, una con M (muestra) y otra con C (control). 2. Atemperar muestras, control y reactivos a 37ºC durante 5-10 min y homogeneizarlos suavemente. 3. Verter 100 microL de muestra en M y otros 100 microL de control en C. 4. Añadir a lo anterior 1

PRÁCTICA: TIEMPO DE PROTROMBINA O TIEMPO DE QUICK Objetivos Medir el tiempo de protrombina Fundamento El PT mide el tiempo que tarda en coagular un PPP (citratado) cuando se provoca la coagulación al añadir tromboplastina hística y Ca+2. Los factores extrínsecos de la coagulación se activan en presencia de tromboplastina cálcica en plasma citratado. Se determina el tiempo de coagulación del plasma después de añadir el reactivo. Sirve para valorar trastornos de la coagulación y valorar la terapia con anticoagulantes. Valora las anomalías cuantitativas/cualitativas en los factores de la vía extrínseca y común de la coagulación (II, V. VII, X y fibrinógeno). También es un indicador de enfermedades hepáticas. Cuando una persona está sometida a anticoagulantes orales, los tiempos están alargados. Se usa para el tratamiento adecuado de Sintrom (acenocumarol). Materiales - Micropipetas - Varillas de acero - Micropipetas y puntas de pipeta - Coagulómetro - Tubos Eppendorf Técnica 1. Preparació

 PRÁCTICA: TEST DE HOWELL Objetivos El test de Howell es una prueba que mide el tiempo que tarda en coagularse un plasma rico en plaquetas (PRP), que se obtiene al centrifugar sangre anticoagulada con citrato sódico a 3.000 rpm durante 10 minutos. Fundamento El resultado del test de Howell es el tiempo que pasa desde que le hemos añadido CaCl 2  (Cloruro cálcico) al plasma rico en plaquetas (PRP) hasta su coagulación. Material - Centrífuga - Pipeta Pasteur - Vaso de precipitado - Tubos Eppendorf - Rotulador de vidrio - Pipetas automáticas y puntas de pipeta Reactivos - Solución salina al 0'85% - Solución de cloruro cálcico 0'025 M - Pool de plasmas normal Técnica 1. Atemperar los reactivos y la muestra, a 37ºC. Para ello, deben situarse estos en un baño de agua a 37ºC durante 5 a 15 minutos. 2. Rotular un tubo de hemólisis con la letra M (muestra) y otro con la letra C (control) 3. Introducir los tubos en el baño de agua. 4. Depositar 0'1 ml de muestra, en el tubo M, y 0

 PRÁCTICA: PRUEBAS DE SANGRÍA O HEMORRAGIA 1. TIEMPO DE SANGRÍA POR EL MÉTODO DE DUKE Objetivos Conocer el tiempo de sangría mediante la exploración de la fase vascular  y plaquetaria de la hemostasia de un paciente. Fundamento Esta prueba se realiza para comprobar la reacción de los pequeños vasos ante una lesión, lo que depende de la integridad de la pared vascular, de su capacidad constrictora y del número, y la calidad, de las plaquetas que formarán el tapón hemostático. Se efectúa la prueba en el lóbulo de la oreja, tras hacer una punción con una lanceta desechable, mientras que el método de Ivy se realiza en el antebrazo, el cual se hallará sometido a presión. Técnica Desinfectar con alcohol de 70º la zona donde se realizará la punción. Dejar secar la zona. Realizar la punción sin presionar la zona. Con un círculo de papel de filtro, usando el borde y « de canto «, tomar contacto con la gota para que el papel la absorba, teniendo especial cuidado de no contactar directamente con

  PRÁCTICA: PRUEBA DE RUMPEL-LEEDE OBJETIVO Evaluar la resistencia que ofrecen las paredes capilares al aumento de la presión intracapilar y a la anoxia. FUNDAMENTO Se basa en la aplicación de presión a través de un torniquete , durante un tiempo determinado y observar si aparecen o no petequias. MATERIAL NECESARIO ·          Bolígrafo ·          Esfigmomanómetro ·          Fonendoscopio ·          Reloj DESARROLLO DE LA PRÁCTICA Observar la presencia de petequias antes de comenzar la prueba. Medir la presión arterial del paciente y calcular la media entre la presión arterial sistólica y diastólica. Trazar un círculo de unos 5cm de diámetro en la cara anterior del brazo. Colocar el manguito del esfigmomanómetro en el brazo seleccionado e insuflar aire, hasta ejercer una presión sobre el brazo equivalente a la presión arterial media del paciente, que previamente se ha medido. Mantener la presión durante 5 minutos.

 PRÁCTICA 21: RECUENTO DE PLAQUETAS EN CÁMARA DE NEUBAUER OBJETIVO Aprender a contar plaquetas con una cámara de recuento Neubauer .   FUNDAMENTO Para el recuento de plaquetas en cámara, se diluye la muestra de sangre en un líquido apropiado, depositando la mezcla, posteriormente, en la cámara de recuento para su observación.   MATERIAL NECESARIO Microscopio Tubo de ensayo Micropipeta Pipeta de 2ml Prepipeta Gradilla Cámara de recuento neubauer Cubreobjetos Placa de petri Papel de filtro   REACTIVOS Agua destilada Líquido de dilución laboratorios Spinreact u Oxalato amónico al 1%.   MUESTRA Sangre venosa anticoagulada   DESARROLLO DE LA PRÁCTICA Vertemos en tubo de ensayo 0,99 ml aproximadamente de líquido de dilución, con ayuda de una pipeta. Añadimos 0,01ml de la sangre problema con ayuda de una micropipeta. El objetivo es una dilución 1/100 , las cantidades pueden