PRÁCTICA 21: RECUENTO DE PLAQUETAS

 PRÁCTICA 21: RECUENTO DE PLAQUETAS EN CÁMARA DE NEUBAUER

OBJETIVO

Aprender a contar plaquetas con una cámara de recuento Neubauer.

 

FUNDAMENTO

Para el recuento de plaquetas en cámara, se diluye la muestra de sangre en un líquido apropiado, depositando la mezcla, posteriormente, en la cámara de recuento para su observación.

 

MATERIAL NECESARIO

• Microscopio

• Tubo de ensayo

• Micropipeta

• Pipeta de 2ml

• Prepipeta

• Gradilla

• Cámara de recuento neubauer

• Cubreobjetos

• Placa de petri

• Papel de filtro

 

REACTIVOS

• Agua destilada

• Líquido de dilución laboratorios Spinreact u Oxalato amónico al 1%.

 

MUESTRA

Sangre venosa anticoagulada

 

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

• Vertemos en tubo de ensayo 0,99 ml aproximadamente de líquido de dilución, con ayuda de una pipeta.

• Añadimos 0,01ml de la sangre problema con ayuda de una micropipeta.
• El objetivo es una dilución 1/100, las cantidades pueden variar.

0'99 ml de diluyente = 990 microL

0'01 ml de muestra de sangre = 10 microL

• Tapamos el tubo con parafilm y mezclamos.

•  Movemos suavemente el tubo con la muestra durante 5 minutos.
• Aspiramos una pequeña porción con ayuda de una pipeta Pasteur, y depositamos una gota en cada uno de los retículos de la cámara de recuento.

• Colocamos un trozo de papel de filtro húmedo en una placa de Petri
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• Introducimos la cámara de Neubauer en su interior durante 15 minutos, para que las plaquetas sedimenten correctamente sin que se reseque la dilución.
• Otra manera de realizar la dilución es con la pipeta Thoma para eritrocitos, aspirando hasta la señal de 1 con la muestra de sangre y hasta la señal de 101 con el diluyente.

 

OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO

• Contamos uno de los cuadrados grandes del retículo, que puede ser el central.

• El condensador bajo facilita la visualización.
• Las plaquetas se observan pequeñas y refringentes.

RESULTADO

Para calcular el número de plaquetas por mm3 de sangre, se aplica la siguiente fórmula:

 

PLT/mm3 = P x V x D = P x 1000

No se pudo realizar el contaje de plaquetas debido al mal funcionamiento del microscopio, el objetivo 40X no enfocaba bien las cuadrículas de la cámara de Neubauer y la lente estaba demasiado sucia. Pero aún así, se pudo visualizar alguna plaqueta.

En el autoanalizador el recuento de plaquetas fue: 476.000 plaquetas/mm3 de sangre