PRÁCTICA: DETERMINACIÓN DE UN Du (VARIANTE DÉBIL)

 PRÁCTICA: DETERMINACIÓN DE UN Du

1. OBJETIVOS

Determinar la presencia de un Du en la superficie eritrocitaria.

2. FUNDAMENTO

El Du es un antígeno D débil, que no suele dar la cara en pruebas normales para el Rh.

Primero, sensibilizaremos los hematíes problema con un suero con anticuerpos anti-D.

Segundo, Los enfrentaremos al suero de Coombs.

• Si existe el antígeno Du en la superficie de los eritrocitos, se producirá la unión de los anticuerpos anti-D a sus receptores de membrana.
• Esto dará lugar a la aglutinación en presencia del suero Coombs, en una segunda fase.

3. MATERIALES Y REACTIVOS

• 2 Tubos de centrífuga (Uno para compensar)
• Centrífuga
• Pipetas pasteur
• Gradilla
• Baño de agua
• Cronómetro
• Vaso de precipitado
• Pipeta de vidrio
• Prepipeta
• Suero anti-D humano
• Suero de Coombs
• Suero fisiológico

4. PROTOCOLO

1. Realizamos la prueba de Rh en porta entre las muestras buscando un Rh –.

2. Echamos en un tubo de hemólisis una gota de suero anti-D y una gota de suspensión de hematíes al 5%.

3. Mezclamos suavemente e incubamos a 37ºC, 30-45′.

4. Después de incubar, lavamos los hematíes en solución salina 3 veces. Para ello, añadimos 1ml de suero fisiológico y centrifugamos a 1000 rpm en cada lavado.

5. Decantamos la solución salina completamente en el último lavado.

6. Añadimos sobre el sedimento 1 gota de suero de Coombs y mezclamos suavemente.

7. Centrifugamos durante 1′ a 1000 rpm.

5. RESULTADOS

Partimos de una muestra Rh-

Observamos si hay o no hay aglutinación, dando golpecitos suaves en el fondo del tubo.

• Si es +, hay antígeno Du en la membrana de los eritrocitos y se clasifica Rh+, variante Du.
• Si es -, se clasifica como Rh-.

En el caso +, hay que realizar una prueba de Coombs directa, para confirmar el resultado.

Como la muestra no ha aglutinado, podemos decir que es Rh- y no hay antígenos Du en la membrana de los eritrocitos.