PRÁCTICA 17 DETERMINACIÓN DE LA HEMOGLOBINA EN SANGRE

 

PRÁCTICA 17: DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA EN SANGRE

Ø  Número de Procedimiento/técnica: 17

Ø  Denominación: Determinación de hemoglobina en sangre

Ø  Nombre del técnic@ que lo realiza: Araceli Alejandra Rojas Arispe

Ø  Grupo de trabajo: Ainhoa Castro Larrauri y Araceli Alejandra Rojas Arispe

 

1.     Fundamento

Se basa en la transformación de la hemoglobina en CIANMETAHEMOGLOBINA, al añadir a la muestra de sangre ciertos componentes del reactivo de DRABKIN. En primer lugar, el Fe²⁺ se oxida a Fe³⁺, dando lugar a metahemoglobina.

Hb Fe (II)+ Fe (III) (CN)₆ ³                                Hb Fe (III)+ Fe (III) (CN)₆ ⁴  

Luego, en presencia de cianuro potásico, pasa a cianmetahemoglobina, de color rojo y con un pico de absorción máximo a 540 nm y cuya concentración puede ser determinada por métodos colorimétricos, empleando un patrón de concentración conocida.

Hb Fe (III)+  CN^-                             Hb Fe (III) CN

2.     Material, aparataje y reactivos

• 7 tubos de ensayo
• Pipeta de 5ml
• Prepipeta
• Micropipeta
• Puntas de micropipeta
• Vaso de precipitado
• Parafilm
• Espectrofotómetro
• Matraz aforado
• Reactivo de Drabkin

- Ferricianuro potásico 0,6 mmol/l

-  Cianuro potásico 77 mmol/l

-  Dihidrógeno fosfato de potasio 2mmol/l

1.     Protocolo

1. Condiciones de ensayo:

• Longitud de onda: 540 nm.
• Cubeta: 1 cm paso de luz.
• Temperatura: 15-25ºC.

2. Ajustar el espectofotómetro a cero frente a agua destilada.

3. Pipetear:

4. Una vez hechas las mezclas con las cantidades descritas en la tabla, dejamos incubar 3 minutos a temperatura ambiente.

5. Leemos la absorbancia de los calibradores y la muestra, frente al Blanco de reactivo.

1.     Resultados (y cálculos)

Muestra: 0'343 A

Patrón 1: 0'294 A

(A muestra/A patrón) x 15 g/dl = (0'343/0'294) x 15 g/dl = 17'5 g/dl hemoglobina

Patrón 2: 0'122 A  

(0'343/0'122) x 7'5 g/dl = 21'09 g/dl hemoglobina

Patrón 3: 0'057 A

(0'343/0'057) x 3'75 g/dl = 22'57 g/dl hemoglobina