PRÁCTICA 16: CURVA DE CALIBRACIÓN POR FOTOMETRÍA

 PRÁCTICA 16: CURVA DE CALIBRACIÓN POR FOTOMETRÍA

Ø  Número de Procedimiento/técnica: 16

Ø  Denominación: Curva de calibración por fotometría

Ø  Nombre del técnic@ que lo realiza: Araceli Alejandra Rojas Arispe

Ø  Grupo de trabajo: Ainhoa Castro Larrauri y Araceli Alejandra Rojas Arispe

 

1.     Fundamento

Consiste en hacer una curva de calibración con patrones de concentración conocida y relacionarla con la absorbancia de cada uno de ellos, se hace una curva o recta que relaciona estos dos parámetros. 

2.     Material, aparataje y reactivos

 - Matraces aforados 25 mL,100 mL

- Pipetas y micropipetas

- Agua destilada

- Solución permanganato potásico

- Cubetas de espectrofotometría

- Embudo

Protocolo

A. Con una pipeta graduada, tomar 1 mL de la disolución 0,1M de KMnO ₄ y verterlo en un vaso de precipitado de 100 mL. Añadir poco a poco, y agitando cuidadosamente, agua destilada (grifo) hasta que la disolución resultante presente un color similar al de la muestra problema.

B. Con la disolución preparada se obtendrá el espectro de absorción como sigue:

- Debido al color púrpura de la disolución de KMnO ^4-, podemos predecir la zona del espectro en la que se obtendrá la máxima absorbancia. Después de poner a punto el espectrofotómetro, con la ayuda del profesor, seleccionar una longitud de onda 20 nm por debajo del límite inferior del intervalo correspondiente. Se utiliza púrpura porque abarca todos los espectros de absorción de luz, el espectrofotómetro solo mide uno, mono.

- "Hacer el blanco" para dicha longitud de onda. Es decir, toma una de las cubetas y, tras llenarla con agua destilada (es el blanco para este caso particular), sitúala en el portacubetas del espectrofotómetro y ajusta la lectura al cero de Absorbancia.

- A continuación llena la otra cubeta con la disolución previamente preparada, sitúala en el portacubetas y espera unos segundos hasta que la lectura de absorbancia se estabilice. Anota el valor de absorbancia obtenido para esta longitud de onda.

- Selecciona en el espectrofotómetro una longitud de onda 10 nm superior a la anterior y repite el proceso anteriormente descrito.

- Repite de nuevo todo el proceso hasta alcanzar una longitud de onda 20 nm por encima del límite superior del intervalo de longitudes de onda correspondiente al espectro de absorción del KMnO^{4- :} seria de 540nm). Normalmente va a venir en el fabricante con el patrón.

Curva de calibración

A: Siguiendo el procedimiento ya conocido, medir la absorbancia de cada una de las 3 disoluciones patrón a la longitud de onda seleccionada. Recordar que antes de la medición de cada patrón debe hacerse el blanco. Los patrones tienen una concentración conocida. El blanco en nuestro caso será agua destilada o del grifo. En otros casos se pone la cubeta vacía, en otros los reactivos utilizados sin muestra o sin patrón.

La medición de la absorbancia de los tres patrones debe realizarse en orden creciente de concentraciones y utilizando una misma cubeta. Para ello, después de cada medida:

- Desechar la disolución patrón ya medida

- Limpiar la cubeta con agua destilada varias veces

- Limpiar la cubeta con la nueva disolución patrón una vez

- Llenar la cubeta con la nueva disolución patrón y medir

B. Con las absorbancias anotadas para cada una de las disoluciones patrón, representar gráficamente, en un excel la curva de calibrado 

Cubetas    Concentración      Absorbancia

   0                 0                           0

   1                 2                           0'033

   2                 6                           0'057

   3                10                          0'12