PRÁCTICA 14: ESTUDIO DE LA FRAGILIDAD OSMÓTICA DE LOS ERITROCITOS (FOE-ROE)

 

PRÁCTICA 14: ESTUDIO DE LA FRAGILIDAD OSMÓTICA DE LOS ERITROCITOS (FOE-ROE)

Ø  Número de Procedimiento/técnica: 14

Ø  Denominación: Estudio de la fragilidad osmótica de los eritrocitos  

Ø  Nombre del técnic@ que lo realiza: Araceli Alejandra Rojas Arispe

Ø  Grupo de trabajo: Ainhoa Castro Larrauri y Araceli Alejandra Rojas Arispe

 

1.     Fundamento

El estudio de la fragilidad osmótica de los hematíes valora la resistencia de los eritrocitos a soluciones de presión osmótica decreciente, en condiciones constantes de pH y de temperatura. Para ello, se enfrentan los hematíes problema a soluciones tamponadas de cloruro sódico cuya concentración es decreciente a partir de 9 gramos por mil (soluciones hipotónicas).

Cuando los eritrocitos están en contacto con soluciones hipotónicas, penetra agua a través de su membrana y se hinchan. Al hincharse los hematíes, una parte de la Hb que contienen puede salir al exterior a través de los poros de su membrana. Si la entrada de líquido es excesiva, los hematíes se rompen y dejan libre toda la Hb que engloban (hemólisis).

En condiciones normales, un eritrocito puede aceptar sin hemolizarse una entrada de agua que incremente su volumen en un 70 % como máximo.

Esta prueba evalúa por tanto la capacidad que tienen los glóbulos rojos de soportar un incremento de su contenido acuoso (resistencia osmótica eritrocitaria o ROE). Dentro de una misma sangre, la ROE de los hematíes varía de unos a otros.

2.     Material, aparataje y reactivos

•   Pipetas Pasteur
• Tubos de centrífuga iguales entre sí.
•  Un reloj.
•  Una centrífuga.
•  Un espectrofotómetro.
•  Cubetas de espectrofotómetro.
• Una gradilla.
• Suero fisiológico tamponado

3.     Protocolo

Preparar una batería de soluciones de cloruro sódico, a concentraciones decrecientes, de la forma que se indica en la Tabla.

Hay kits comerciales, para la realización de esta prueba, que consisten en una batería de soluciones, tamponadas y estabilizadas, de cloruro sódico a distintas concentraciones.

2. Añadir a cada tubo 1 gota (0,05 mL = 50 µL) de sangre completa.

Esto ha de hacerse de forma que la gota llegue a la solución de cloruro sódico sin que toque la pared interna del tubo.

3. Agitar suavemente los tubos.

4. Dejar los tubos en reposo al menos 30 minutos, a temperatura ambiente (unos 25 ºC).

5. Centrifugar los tubos a 2.000 revoluciones por minuto (rpm), durante 5 minutos.

1.     Resultados (y cálculos)

 Lectura espectrofotométrica:

                                  Absorbancia

Tubo 1 (Blanco)       0'1983

Tubo 2                      0'2831

 Tubo 4                     0' 1476  

Tubo 6                      0'8834

Tubo 8                      1'6789

Tubo 10                    1'7619

Tubo 12                    1'8010

Tubo 14                    1'8390

Tubo 16                    1'7724

Tubo 18                    1'7661

3.     Valoración y conclusiones

El tubo con mayor hemólisis debería ser el tubo 18 por presentar mayor solución hipertónica. Y el de menor hemólisis el tubo 2. Sin embargo, no es lo que refleja nuestros resultados, puede ser debido a una mala praxis en la preparación de la solución hipertónica o en el preparado de cada uno de los tubos.