PRÁCTICA 12: TINCIÓN VITAL Y CONTAJE DE RETICULOCITOS

 PRÁCTICA 12: TINCIÓN VITAL Y CONTAJE  DE RETICULOCITOS

Ø  Número de Procedimiento/técnica: 12

Ø  Denominación: Tinción vital y contaje de reticulocitos  

Ø  Nombre del técnic@ que lo realiza: Araceli Alejandra Rojas Arispe

Ø  Grupo de trabajo: Ainhoa Castro Larrauri y Araceli Alejandra Rojas Arispe

 

1.     Fundamento

podemos observar los reticulocitos al microscopio óptico mediante la tinción de azul de metileno nuevo o azul de cresil brillante. En este caso la tinción es de células vivas, TINCIÓN VITAL. Por ello 1º se va a teñir la sangre y después se va a hacer la extensión. Al extenderlas se produce la desecación de las células como único medio de fijación, para que no mueran; es decir no se va a utilizar fijador (metanol). Lo que se va a estudiar es el grado de maduración del reticulocito: desde grado I a IV. Cuantos más retículos o restos de RNA menos maduros. Tambien se va a contar el nº de reticulocitos con respecto a hematies.

 En la actualidad ésto se demanda mucho siempre que se vea una anomalía, no es un valor que se pida en el hemograma normal.

2.     Material, aparataje y reactivos

•  Microscopio óptico. 
• Tubos de hemólisis.
• Pipetas Pasteur. Portas. 
• Baño de agua.
• Sistemas de filtración.
• Azul de cresil, comercial, si no se hace de la siguiente manera:

Azul de cresil en polvo.

Solución salina 0,9%.

Citrato sódico al 3%.

Agua destilada.

Aceite de inmersión.

• Muestra de sangre con EDTA 

Protocolo

1. Preparación del colorante

• Se han mezclado 80ml de suero salino con 20ml de de citrato sódico al 3%.
• Con una balanza de precisión, han pesado 1g de azul cresil brillante.
• A la mezcla anterior se le ha añadido el gramo de azul cresil brillante pesado.
• Se ha filtrado el colorante con papel de filtro, para evitar precipitados que puedan alterar la tinción.

2. Tinción de la muestra

• Echamos tres gotas de colorante en un tubo de hemólisis con otras tres gotas de sangre.

• Mezclamos con suavidad y tapamos con parafilm.

• Lo dejamos al baño maría durante 5 minutos.

• Una vez pasados los 5 minutos, movemos suavemente de nuevo, y añadimos una gota de la mezcla para hacer una extensión 

4. Observaciones

En esta práctica no se encontró ningún reticulocito.