PRÁCTICA 11: RECUENTO DE HEMATÍES

 PRÁCTICA 11: RECUENTO DE HEMATÍES

Ø  Número de Procedimiento/técnica: 11

Ø  Denominación: Recuento de hematíes

Ø  Nombre del técnic@ que lo realiza: Araceli Alejandra Rojas Arispe

Ø  Grupo de trabajo: Ainhoa Castro Larrauri y Araceli Alejandra Rojas Arispe

 

1.     Fundamento: 

Para el recuento con cámara Neubauer, se diluye la sangre en un líquido apropiado (líquido de Hayem), se deposita en la cámara y se cuentan las células presentes en algunos de os cuadros de los retículos. 

2.     Material, aparataje y reactivos

•  Pipeta diluidora de Thoma, para recuento de glóbulos rojos.
• Un tubo de goma con boquilla, adaptable a la pipeta diluidora.
• Pipetas automáticas y puntas de pipeta como alternativa
• Una cámara de Neubauer mejorada. Un cubre. Un microscopio. 
• Líquido de Hayem (comercial) si se hace en el laboratorio: 2,5g de sulfato sódico.2,5g de cloruro sódico.0,25g de cloruro mercúrico.100Ml de agua destilada. Si contiene precipitados, filtrarlo antes de usar.
• Sangre con EDTA

3.     Protocolo

  Situar un cubre sobre el retículo de la cámara. Para facilitar su adhesión a ésta, se ejerce una ligera presión al tiempo que se desliza el cubre sobre las bandas laterales, previamente humedecidas con H₂O, de su porción central.

 Aspirar la sangre hasta la señal de 0,5 (si se cree que puede haber una policitemia) o hasta la de 1 (si se piensa en anemia).

En el caso de que se sobrepase algo el enrase, se hace descender la columna de sangre tocando la punta de la pipeta con un algodón. 

Limpiar cuidadosamente la pipeta con un algodón y sin hacer bajar el nivel de sangre.

Aspirar el líquido diluyente hasta la señal de 101.

Desenganchar el tubo de goma de la pipeta y homogeneizar el contenido del bulbo. Para ello se sujeta la pipeta por sus extremos, con los dedos pulgar e índice, y se agita suavemente en sentido horizontal durante 2 o 3 minutos.

Desechar las 3 primeras gotas emitidas por la pipeta. Éstas corresponden al líquido presente en el tubo capilar largo de la pipeta Thoma (PIPETA AUTOMÁTICA), que no está mezclado con la sangre.

 Depositar la siguiente gota entre la cámara y el cubre. Esto se realiza ubicándola en uno de los bordes no adheridos del cubre y dejándola que penetre por capilaridad, en el espacio existente entre ambas estructuras. 

Durante esta operación hay que evitar que se formen burbujas y que rebose la sangre diluidora por fuera de los bordes del cubre.

Para ello, se coloca la pipeta en posición casi vertical, se sitúa la punta de la pipeta en el borde apropiado, se disminuye algo la presión ejercida por el dedo índice sobre el otro extremo de la pipeta y se retira ésta justo antes de que se llene completamente el espacio comprendido entre el cubre y la cámara.

Dejar reposar la sangre diluida, contenida en la cámara, durante unos minutos, para que las células presentes en ella puedan sedimentarse.

 Enfocar el retículo con el objetivo de 40x y con el condensador a baja altura, y verificar que la distribución de los hematíes es homogénea.

 Contar los hematíes presentes en 80 cuadrados pequeños del cuadrado grande central. Esto se logra, por ejemplo, contando los hematíes que hay en los 4 cuadrados medianos de las esquinas y en el del centro.

Para evitar contar repetidamente los mismos hematíes, sólo se cuentan los que están contenidos dentro del cuadrado y los que están en contacto con sus líneas de demarcación superior y derecha.

A la hora de observar los cuadrados, se sigue un orden en zig-zag.

LECTURA DE LOS RESULTADOS

Como se cuentan los hematíes presentes en 5 cuadrados medianos del cuadrado grande central, y éste tiene 25 cuadrados medianos, hay que multiplicar por 5 la cifra obtenida en el recuento, para calcular el número de hematíes que hay en un cuadrado grande.

 

Como la longitud de cada uno de los lados del cuadrado grande central es de 1mm, y la longitud del espacio comprendido entre éste y el cubre es de 0,1mm, hay que multiplicar por 10 el resultado anterior, para determinar así el número de hematíes existentes, no en 0,1mm³, sino en 1mm³.

Como la sangre, previamente al recuento se diluye, hay que multiplicar este resultado por 100, si se ha partido de la sangre entera contenida en el enrase de 1, o por 200 si se ha partido de la sangre entera contenida hasta el enrase 0,5 así la fórmula a aplicar es la siguiente:

 Nº de células contadas (H) por el factor de conversión (50) y el de dilución (D)  (100/200)

4. Observaciones

El contaje en 5 cuadrados del cuadrado grande central fueron los siguientes:

1º 83

2º57

3º 61

4º 77

5º 81

En total = 359 hematíes

RBC = H x 5 x 10 x D = 359 x 5 x 10 x 200 = 3590000 de hamatíes por milímetros cúbicos de sangre. 

Como el resultado está por debajo de los valores de referencia (4'5-6 millones de hematíes por milímetro cúbico de sangre), el paciente padece eritropenia.